一步法试剂盒使逆转录和qPCR两种反应在同一管中进行，只需要加入模板RNA、特异性PCR引物和RNase-Free ddH2O即可。
试剂盒可以快速、高效的对病毒RNA或微量RNA进行定量分析
试剂盒使用独特的Foregene反转录试剂和Foregene HotStar Taq DNA Polymerase相结合，并配合独特的反应体系，有效提高反应的扩增效率和特异性。
优化的反应体系使得反应具有更高的检测灵敏性，更强的热稳定性，更好的耐受性。
RT-qPCR EasyTM (One Step)-Taqman试剂盒附带有ROX内参染料，可用于消除信号本底及孔间信号误差，方便客户用于不同型号的定量PCR仪
产 品 名 称 | 一步法RT-qPCR试剂盒-Taqman RT-qPCR EasyTM (One Step)-Taqman | ||
货 号 | RT-02131 | RT-02132 | |
规 格 | 100 × 20 μL rxns | 500 × 20 μL rxns | |
价 格 | ￥1,213.00 | ￥4,854.00 | |
| 描 述 | 快速特异的对RNA模板进行Real Time RT-PCR定量检测 | ||
产品介绍
Foregene One-Step RT-PCR Easy系列产品实现了从RNA到双链DNA的一体化反应，即逆转录和PCR扩增在同一个反应离心管、同一个反应体系中完成，简化了实验步骤、提高了实验效率、优化了实验方案。
RT-qPCR EasyTM (One Step)-Taqman采用了Foregene HotStar Taq DNA Polymerase，优化的Taqman qPCR体系，可以快速特异的对微量RNA模板进行Real Time RT-qPCR定量检测。
试剂盒应用
v 可以快速、准确地对RNA病毒等微量RNA进行分析。
v 特别适合对高GC含量或具有复杂二级结构的RNA模板进行分析。
储存条件
试剂盒避光保存于-20℃。产品收到后立即存放于-20℃恒温冰箱中。如果存储条件适当，产品在1年有效期内不会降低任何性能。
剂盒内容
2× RT-qPCR EasyTM Mix-Taqman：Foregene Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor、Foregene HotStar Taq DNAPolymerase、优化配比的dNTPs、Mg2+、稳定剂、增强剂、优化剂。
ROX Reference Dye：一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR扩增仪上，用于调整PCR加样误差所引起的 PCR管与管之间的差异。不同仪器所需ROX ReferenceDye浓度不同，用户可以根据仪器的推荐浓度添加。
Foregene Reverse Transcriptase
Foregene逆转录酶能够提供高效、特异性强的逆转录反应。逆转录酶表现出很高的亲和力，并在 50°C反应温度条件下仍然保持良好的逆转录活性，能够很好的逆转录其他逆转录酶不能处理的二级结构复杂的RNA。Foregene Reverse Transcriptase 灵敏度高，使用的RNA 量范围广泛(0.1pg≤RNA≤1μg) 。
Foregene HotStar Taq DNA Polymerase
提供了PCR的高度特异性扩增。反转录进行时，DNA聚合酶是完全无效的，不妨碍反转录反应。后通过PCR反应程序，加热到94°C，激活DNA聚合酶同时，失活逆转录酶。热启动过程消除了第一个循环时非特异性退火的引物和引物二聚体的形成，保证PCR扩增的高度特异性和可靠性。
RNA模板浓度
(0.1pg-100ng total RNA)/20μL 体系
说明书
产品文献
MSDS
COA
RT-PCR未出现目的片段
Answer
1. 模板RNA被降解
建议：使用新鲜样品提取，应用高质量高纯的RNA(建议使用Foregene Total RNA Isolation Kit系列提取纯化RNA)；-80℃储存的RNA应避免反复冻融。
2. RNA含有抑制剂
建议：逆转录抑制剂一般包括SDS、胍盐、EDTA等，建议通过70%的乙醇对RNA沉淀进行清洗，除去抑制剂；或使用Foregene Total RNA Isolation Kit系列提取纯化RNA。
3. 引物设计问题
建议：按照引物设计原则，重新设计引物进行检查。
出现引物二聚体或非特异性扩增
Answer
1. RNA中有基因组DNA污染。
建议：使用扩增级的DNase I进行处理，设置没有逆转录的对照检测DNA污染。
2. Mg2+浓度不适合。
建议：我们提供的Mix中Mg2+浓度为3.5 mM。但针对有些特殊引物和模板可能需要较高浓度的Mg2+，因此可直接添加MgCl2进行Mg2+浓度的优化，建议每次增加0.5mM的Mg2+进行优化。
3. PCR退火温度过低。
建议：对引物做梯度PCR，选择合适的退火温度。
4. PCR产物太长。
建议：荧光定量PCR产物长度最好在100-300bp之间。
5. 引物出现降解，引物降解会导致非特异性扩增出现。
建议：可使用SDS-PAGE电泳检测引物是否降解，更换新的引物进行实验。
6. PCR体系不当，或体系太小。
建议：PCR反应体系太小会导致检测精度降低。最好使用定量PCR仪推荐的反应体系重新进行实验。
7. PCR循环数过多。
建议：适当降低PCR循环次数。
无扩增信号
Answer
1. 试剂盒保存不当导致SYBR Green I失效或者试剂盒过期导致SYBR Green I荧光信号丢失。
建议：2× RT-qPCR EasyTM Mix-SYBR试剂要-20℃避光保存，且避免反复冻融。
2. RNA模板中存在大量酶抑制因子。
建议：重新纯化模板或降低模板的使用量。
3. PCR扩增条件不适合、引物序列或者浓度不当。
建议：确认引物序列的正确性以及引物没有降解；扩增信号不好时，可尝试降低退火温度，适当调整引物浓度等。
4. 模板用量问题，太少或过多。
建议：可进行模板线性化梯度稀释，选择PCR效果最好的模板浓度进行荧光定量实验。
负对照出现过高的荧光值
Answer
1. 在操作过程中导致的试剂污染。
建议：更换新的试剂进行RT-PCR实验。
2. PCR反应体系配制时发生污染。
建议：操作时进行必要的防护措施，比如：戴乳胶手套，使用带滤芯的枪头等。
3. 引物出现降解，引物降解会导致非特异性扩增出现。
建议：可使用SDS-PAGE电泳检测引物是否降解，更换新的引物进行RT-PCR实验。
本产品是专门为Real Time PCR研制的快速去除基因组DNA污染的逆转录体系。5× gDNase Mix能在42°C，2min快速去除RNA中残留的基因组，有效的避免了基因组对qPCR结果的干扰。
本产品是专门为Real Time PCR研制的逆转录体系，预混优化配比的反转录引物（Oligo(dT)引物和随机引物），无需单独添加。
便捷的逆转录预混体系Master Premix，逆转录产物适用于克隆全长cDNA，qPCR等。
