产 品 名 称 | 培养细胞总RNA提取试剂盒 Cell Total RNA Isolation Kit | |
货 号 | RE-03111 | RE-03113 |
规 格 | 50T | 200T |
价 格 | ¥718.00 | ¥2,449.00 |
描 述 | 快速从多种培养细胞中纯化高质量总RNA，试剂盒包含Foregene纯化柱及试剂。 | |
产品介绍
该试剂盒采用本公司研制的离心柱和配方，可以高效率的从96、24、12、6孔板培养细胞中提取得到高纯度高质量的总RNA。试剂盒提供高效的DNA-Cleaning Colunm，能轻松的让上清液和细胞裂解物分离并吸附除去基因组DNA，操作简便、省时；该RNA-only Column能高效的结合RNA，搭配独特的配方，可以同时处理大量样品。
全体系RNase-Free，使得提取的RNA无降解；Buffer RW1、Buffer RW2缓冲液洗涤体系，使得获得的RNA无蛋白、无DNA、无离子、无有机化合物污染。
试剂盒应用
该试剂盒适用于从96、24、12、6孔板培养细胞总RNA提取纯化。
纯化RNA的应用
培养细胞总RNA提取试剂盒提取得到的总RNA可用于各种下游分子实验，例如：cDNA合成，RT-PCR、Real Time PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译、芯片分析、PolyA筛选、分子克隆和RNase保护分析等。
RNA提取得率和纯度
使用培养细胞总RNA提取试剂盒纯化得到的RNA，其产量与细胞初始量、新鲜程度、细胞保存时间以及操作相关。以下是使用该试剂盒提取RNA，几种培养细胞RNA得率与纯度，实际操作中，可能与该数据有些许出入。
细胞类型 | RNA得率(106) | OD260/280 | OD260/230 |
MKN-74 | 15-20 μg | 1.8-2.1 | 1.8-2.1 |
293T | 14-18 μg | 1.8-2.1 | 1.8-2.1 |
SKBR3 | 15-20 μg | 1.8-2.1 | 1.8-2.1 |
储存条件
常温(15–25℃)，有效期为 24个月。
试剂盒内容
Buffer cRL1：提供细胞裂解所需的环境。
Buffer cRL2：提供 RNA 的特异上柱环境。
Buffer RW1：去除 RNA 中的蛋白质、DNA 等杂质。
Buffer RW2：去除 RNA 中残留的盐离子。
RNase-Free ddH2O：洗脱纯化柱膜上的总 RNA。
DNA-Cleaning Column：特异吸附细胞裂解产物中的 DNA，并过滤除去裂解产物 中的固体杂质。
RNA-only Column：特异吸附上通过 DNA-Cleaning Column 滤液中的总 RNA。
产品信息
型号 | 离心柱型 | 纯化组件 | Foregene离心柱、试剂 |
通量 | 1-24个样品 | 制备时间 | ~11 min (24个样品) |
离心机 | 台式离心机 | 细胞裂解物分离 | 离心分离 |
纯化柱RNA承载量 | 60 μg | 离心柱液体盛装量 | 800 μL |
洗脱体积 | 20-50 μL | 细胞样本处理量 | 104—106 cells |
操作流程
说明书
产品文献
Wang D, Li S, Zhao Z,et al. Engineering a Second-Order DNA Logic-Gated Nanorobot to Sense and Release on Live Cell Membranes for Multiplexed Diagnosis and SynergisticTherapy. Angew Chem Int Ed Engl. 2021 Jul 12;60(29):15816-15820. doi: 10.1002/anie.202103993.
IF:15.336(Foregene #RE-03111)
Liwei Fu, Pinxue Li, Junyao Zhu, et al.Tetrahedral framework nucleic acids promote the biological functions and related mechanism of synovium-derived mesenchymal stem cells and show improved articular cartilage regeneration activity in situ,Bioactive Materials,2021,ISSN 2452-199X.doi:10.1016/j.bioactmat.2021.07.028.
IF:14.593(Foregene #RE-03111)
Xu Y, Niu Y, Wu B, et al. Extended-release of therapeutic microRNA via a host-guest supramolecular hydrogel to locally alleviate renal interstitial fibrosis. Biomaterials. 2021 Aug;275:120902. doi: 10.1016/j.biomaterials.
IF:12.479(Foregene #RE-03111)
Wang C, Li X, Ning W, Gong S, et al. Multi-omic profiling of plasma reveals molecular alterations in children with COVID-19. Theranostics. 2021 Jul 6;11(16):8008-8026. doi: 10.7150/thno.61832.
IF:11.556((Foregene #RE-03111)
MSDS
COA
提取不到RNA或者RNA产量低
Answer
通常会有多种因素影响回收效率，比如：样本RNA含量、操作方法、洗脱体积等。
1. 操作过程中进行了冰浴或低温(4°C)离心。
建议：全程常温(15-25°C)操作，切勿冰浴和低温离心。
2. 样本保存不当或样本保存时间过久。
建议：样本保存于-80℃或冻存于液氮中，并避免反复冻融使用；尽量采用新鲜培养的细胞进行RNA提取操作。
3. 样本裂解不充分。
建议：在细胞裂解时，请保证细胞完全裂解。
4. 洗脱液添加不正确。
建议：确认RNase-Free ddH2O滴加到了纯化柱膜中间位置。
5. Buffer cRL2或Buffer RW2中没有添加正确体积的无水乙醇。
建议：请按照说明书，在试剂盒使用前，Buffer cRL2和Buffer RW2中添加正确体积的无水乙醇并混匀。
6. 细胞样本用量不合适。
建议：每250μl Buffer cRL1最多使用106个细胞，细胞量过多会导致RNA提取得率及纯度降低。
7. 洗脱体积不合适或洗脱不彻底。
建议：纯化柱的洗脱液体积为20-50μl；若洗脱效果并不理想，建议在加入预热的RNase-Free ddH2O后，延长室温放置的时间，例如放置5-10min。
8. 纯化柱在Buffer RW2洗涤之后有乙醇残留。
建议：如果在Buffer RW2洗涤，空管离心1min后还有乙醇残留，可以将空管离心操作的时间增加至2min，或将纯化柱置于室温5min，以充分除去残留乙醇。
纯化获得的RNA有降解
Answer
纯化得到的RNA的质量和样本的保存、RNase污染、操作等因素有关。
1. 细胞样本没有及时保存。
建议：细胞在收集后若不及时使用，请立即低温保存于-80℃或者液氮中。提取RNA请尽量使用新近采取的细胞样本。
2. 细胞样本反复冻融。
建议：样本保存时，最好分成小份保存，使用时取出其中一份即可，避免样本的反复冻融导致RNA的降解。
3. 操作间有RNase引入或没有佩戴一次性手套、口罩等。
建议：RNA提取实验最好在单独的RNA操作间进行，并在实验前清理好实验桌，实验时佩戴一次性手套、口罩，最大程度上避免RNase引入导致的RNA降解。
4. 试剂在使用过程中被RNase污染。
建议：更换新的Cell Total RNAIsolation Kit进行相关实验。
5. RNA操作时所用的离心管、枪头等有RNase污染。
建议：确认RNA提取时所用到的离心管、枪头、移液器等都是RNase-Free。
纯化获得的RNA影响下游实验
Answer
经纯化柱纯化的RNA，如果盐离子、蛋白质含量过多会影响下游实验，比如：逆转录、Northern Blot等。
1. 洗脱后的RNA有盐离子残留。
建议：确认Buffer RW2中添加了正确体积的乙醇，并按操作说明的离心转速进行2次纯化柱洗涤；如果还有盐离子残留，可在纯化柱加入Buffer RW2后，室温放置5min，再进行离心操作，以最大程度上去除盐离子污染。
2. 洗脱后的RNA有乙醇残留。
建议：确认Buffer RW2洗涤后，按操作说明的离心转速进行空管离心操作；如果还有乙醇残留，可以将空管离心操作的时间增加至2min，或者在空管离心后在室温放置5min，以最大程度上去除乙醇残留。
