| 产 品 名 称 | 细菌基因组DNA提取试剂盒 Bacterial DNA Isolation Kit |
| 货 号 | DE-05311 |
| 规 格 | 50T |
| 价 格 | ¥397.00 |
| 描 述 | 快速从对数生长期的细菌中纯化获得高质量的基因组DNA。 |
产品介绍
本试剂盒提供了从各种来源的细菌(革兰氏阴性和革兰氏阳性)培养液中快速简便的提取基因组DNA的方法；一次可处理小于3mL处于对数生长期的细菌培养液(1×109细菌)。试剂盒搭配高效的Foregene Protease，使得可以在1小时内提取到15-50μg高质量的基因组DNA。此外，该试剂盒还可以抽提得到除基因组以外的遗传物质，如质粒，Cosmid，BAC等。
离心柱中采用的DNA-only硅胶基质材料为本公司特有的新型材料，能高效、特异的吸附DNA，对DNA的最大吸附量为80μg，独特的缓冲、洗脱体系可最大限度的去除RNA、杂质蛋白、离子及细胞中其他有机化合物。提取得到的基因组DNA片段大、纯度高、质量稳定可靠，DNA片段大小稳定在23kb左右。
试剂盒应用
该试剂盒适用于纯化以下样本基因组DNA：处于对数生长期的革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌。
纯化DNA的应用
细菌基因组DNA提取试剂盒纯化获得的基因组DNA纯度高，可用于常规分子生物学操作，如：酶切、PCR、Southern杂交、文库构建等实验。
DNA提取得率和纯度
使用细菌基因组DNA提取试剂盒处理细菌获得的基因组DNA量与样本的来源、保存时间、培养时间等因素相关。一般正常情况下获得的细菌基因组DNA为细菌细胞中DNA总和，3mL过夜培养的细菌其基因组DNA产量约在15-50μg。实际操作中，获得的量可能会与该数据有些许出入。
试剂盒内容
Buffer ML1：提供细菌裂解环境。
Foregene Protease：在Buffer ML1的环境下酶解细菌样本。
Lysozyme：消化革兰氏阳性菌细胞壁。
Buffer ML2：失活Foregene Protease，并提供DNA上柱环境。
Buffer PW：去除DNA中的蛋白质、RNA等杂质。
Buffer WB：去除DNA中的残留的盐离子。
Buffer EB：洗脱纯化柱膜上的DNA。
Buffer TE：用于配制100mg/ml Lysozyme的溶液
DNA-only Column：特异吸附裂解产物中的DNA。
产品信息
型号 | 离心柱型 | 纯化组件 | Foregene离心柱、试剂 |
通量 | 1-24个样品 | 制备时间 | ~60 min (24个样品) |
离心机 | 台式离心机 | 细菌裂解物分离 | 离心分离 |
离心柱液体盛装量 | 800 μL | 纯化柱DNA承载量 | 80 μg |
洗脱体积 | 100-200 μL | 细菌处理量 | ≤3ml(培养16-20hr细菌) |
操作流程
说明书
产品文献
PolymeraseChain Reaction using “V” Shape Thermal Cycling Program
Rong Chen, Xue Lu, Mei Li, Gangyi Chen, Yun Deng, Feng Du, Juan Dong, XinHuang, Xin Cui, Zhuo Tang
中国科学院成都生物研究所天然产物研究中心
Theranostics ( IF 8.537 ) PubDate : 2019-02-28 , DOI: 10.7150/thno.31986
文章链接：http://www.thno.org/v09p1572.pdf
Antibacterial activityof Lactobacillus plantarumisolated from Tibetan yaks
Lei Wang, Hui Zhang, Mujee Ur Rehman, Khalid Mehmood, Xiong Jiang, MujahidIqbal ,Xiaole Tong, Xing Gao, Jiakui Li
华中农业大学兽医学院
Microbial Pathogenesis (IF 2.332 ) PubDate : 2018-02, DOI：10.1016/j.micpath.2017.12.077
文章链接：https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0882401017314559
Dynamic changes ofbacterial communities and nitrite character during northeastern Chinesesauerkraut fermentation
Qi Zhou, Shizhu Zang, Zinan Zhao, Xinli Li
中国大连医科大学生物技术系
Food Science andBiotechnology( IF 0.786 )Pub Date : 2018-02, DOI：10.1007/s10068-017-0279-8
文章链接：https://link.springer.com/article/10.1007%2Fs10068-017-0279-8
Orally AdministeredChitooligosaccharides Modulate Colon Microbiota in Normal and Colitis Mice
Ting Long, Zhi-Jun Yu, Jun Wang, Jia Liu, Bing-Shu He
武汉科技大学医学院药学系
International Journal ofPharmacology( IF 0.765 ) PubDate : 2018-01-15, DOI：10.3923/ijp.2018.291.300
文章链接：https://scialert.net/abstract/?doi=ijp.2018.291.300
Clinical analysis ofcases of neonatal Streptococcus agalactiae sepsis
S.J. Zeng, X.S. Tang, W.L. Zhao, H.X. Qiu, H. Wang and Z.C. Feng
南方医科大学北京总医院临床医学院附属八一儿童医院新生儿学部
Genetics and MolecularResearch ( IF 1.013) Pub Date : 2016-06-17, DOI：10.4238/gmr.15027962
文章链接：http://funpecrp.com.br/gmr/year2016/vol15-2/pdf/gmr7962.pdf
Genome sequencingreveals mechanisms for heavy metal resistance and polycyclic aromatichydrocarbon degradation in Delftia lacustris strain LZ-C
Wenyang Wu, Haiying Huang, Zhenmin Ling, Zhengsheng Yu, Yiming Jiang, PuLiuXiangkai Li
中国兰州大学生命科学学院细胞活动与应激适应教育部重点实验室
Ecotoxicology( IF 2.706) Pub Date : 2015-11, DOI：10.1007/s10646-015-1583-9
文章链接: https://link.springer.com/article/10.1007/s10646-015-1583-9
MSDS
COA
提取过程中无法获得基因组DNA
Answer
通常有多种因素会影响细菌基因组DNA产量，包括菌种来源、样本保存条件、消化程度、操作等。
1. 细菌样本保存不当或保存时间太长，导致基因组DNA已经降解。
建议：细菌样本保存于-80℃；尽量使用新近培养的细菌进行基因组DNA的提取。
2. 细菌细胞壁没有破碎。
建议：革兰氏阳性菌细胞壁很厚，需要使用Lysozyme(100mg/mL)在37℃环境中进行细胞壁的降解。
3. Foregene Protease保存不当，导致其活性失活而不能消化细菌细胞。
建议：确认Foregene Protease保存条件或者更换新的Foregene Protease进行酶解反应。
4. 试剂盒保存不当或存放时间太长，导致试剂盒里面某些组分失效。
建议：购置新的细菌基因组DNA提取试剂盒进行相关操作。
5. Buffer WB没有添加无水乙醇。
建议：确认Buffer WB中添加正确体积的无水乙醇。
6. 洗脱液没有正确滴加到硅胶膜上。
建议：将65℃预热的洗脱液滴加到硅胶膜的正中间，并在室温放置5分钟增加洗脱效率。
提取获得低产量基因组DNA
Answer
1. 样本使用量过少。
建议：根据细菌的培养情况来确定细菌用量，有些细菌培养后浓度稀，可以适当增加菌液用量。
2. 革兰氏阳性菌破壁不完全。
建议：可适当增加Lysozyme用量或适当延长Lysozyme消化时间。
3. Foregene Protease保存不当，导致其活性降低或失活。
建议：确认Foregene Protease保存条件或者更换新的Foregene Protease进行酶解反应。
4. 洗脱液问题
建议：请使用Buffer EB进行洗脱；如果使用ddH2O或其他洗脱液，确认洗脱液的pH值在7.0-8.5之间。
5. 洗脱液没有正确滴加
建议：请将洗脱液滴加到硅胶膜的正中间，并在室温放置5分钟增加洗脱效率。
6. 洗脱液体积太少
建议：请按说明书上要求使用洗脱液进行基因组DNA洗脱，最少不要低于100μL。
提取获得低产量基因组DNA
Answer
1. 样本使用量过少。
建议：根据细菌的培养情况来确定细菌用量，有些细菌培养后浓度稀，可以适当增加菌液用量。
2. 革兰氏阳性菌破壁不完全。
建议：可适当增加Lysozyme用量或适当延长Lysozyme消化时间。
3. Foregene Protease保存不当，导致其活性降低或失活。
建议：确认Foregene Protease保存条件或者更换新的Foregene Protease进行酶解反应。
4. 洗脱液问题
建议：请使用Buffer EB进行洗脱；如果使用ddH2O或其他洗脱液，确认洗脱液的pH值在7.0-8.5之间。
5. 洗脱液没有正确滴加
建议：请将洗脱液滴加到硅胶膜的正中间，并在室温放置5分钟增加洗脱效率。
6. 洗脱液体积太少
建议：请按说明书上要求使用洗脱液进行基因组DNA洗脱，最少不要低于100μL。
提取获得基因组DNA纯度低
Answer
基因组DNA纯度低会导致下游实验的失败或效果不理想，如：酶切不开，PCR得不到目的基因片段等。
1. 杂蛋白污染、RNA污染、内毒素污染。
分析：没有使用Buffer PW洗涤纯化柱；Buffer PW洗涤纯化柱没有使用正确的离心转速。
建议：在上清液过柱时尽量保证上清液中无沉淀；务必按说明书进行Buffer PW洗涤纯化柱，并且此步骤不能省略。
2. 杂质离子污染。
分析：省略了Buffer WB洗涤纯化柱或者只洗涤了一次，导致残留的离子污染。
建议：务必按说明书使用Buffer WB洗涤2次，以尽量去除残留的离子。
3. RNA酶污染。
分析：Buffer中添加了外源的RNA酶；Buffer PW洗涤操作不正确，导致RNA酶残留，影响下游RNA实验操作，如：体外转录等。
建议：Foregene系列核酸提取试剂盒无需额外添加RNA酶即可去除RNA，Bacterial Tail DNA Mini Kit里面所有试剂均无需添加RNA酶；务必按说明书进行Buffer PW洗涤纯化柱，并且此步骤不能省略。
4. 乙醇残留。
分析：Buffer WB洗涤纯化柱后，没有进行空管离心操作。
建议：按说明书进行正确的空管离心操作。
5. 其他杂质污染。
分析：细菌使用量过多，以至细菌破壁或消化不完全。
建议：明确细菌用量，一般情况下，>3mL菌液分多个纯化柱进行处理。
