| 产 品 名 称 | 水体基因组DNA提取试剂盒 Water DNA Isolation Kit |
| 货 号 | DE-05613 |
| 规 格 | 50T |
| 价 格 | ¥617.00 |
| 描 述 | 快速从各种水源样本微生物中纯化高质量的基因组DNA。 |
产品介绍
本试剂盒提供了从各种来源的水体样本中快速简便的提取基因组DNA的方法。水体样品中存在大量微生物，这些微生物被作为重要的生态指示剂被广泛应用。从水体中提取高纯度的基因组DNA是水体环境值检测非常重要的手段。
水体样品中含有大量的抑制因子如腐殖酸、金属离子等，这些物质即使微量存在于纯化后的DNA中也会对下游反应产生影响，如对PCR、限制性酶切等。因而纯化水体基因组DNA的关键在于如何有效的去除水体中的抑制因子。采用本公司特有的DNA-only硅胶膜离心柱和溶液配方，搭配Foregene Protease，可以有效的去除水体中各种抑制因子，无需有机溶剂抽提或乙醇及异丙醇沉淀，在40分钟内即可完成对水体样品中DNA的提取操作。
试剂盒应用
该试剂盒适用于纯化以下样本基因组DNA：养殖塘水、池塘水、自来水、湖水、河水、荷塘水等样本。
纯化DNA的应用
水体基因组DNA提取试剂盒纯化获得的基因组DNA纯度高，可用于常规分子生物学操作，如：酶切、PCR、Southern杂交、文库构建等实验。
DNA提取得率和纯度
提取获得的水体基因组DNA量与水体样本的来源、浊度、微生物含量等因素相关。根据WaterDNA Isolation Kit处理各种来源水体样本，获得的基因组DNA量和纯度见下表：
水体来源 | 样本用量(mL) | DNA产量(μg) | OD260/280 | OD260/230 |
河水 | 400 | 1-2 | 1.7-1.9 | 1.7-1.9 |
池塘水 | 400 | 5-7 | 1.7-1.9 | 1.7-1.9 |
养殖塘水 | 20 | 1-2 | 1.7-1.9 | 1.8-1.9 |
自来水 | 4000 | 0.05-0.1 | ≈1.8 | 1.9-2.0 |
注意：此表数据仅作参考，实际操作中由于所用材料的存储条件、操作熟练度等因素影响，所得数据会与此表数据有些许出入。
试剂盒内容
Lysozyme：酶解阳性菌细胞壁。
Buffer TE：用于配制100mg/ml Lysozyme的溶液和提供溶菌酶酶解环境。
Buffer SG1 & Buffer SG2：提供样本蛋白酶酶解环境。
Foregene Protease：在蛋白酶酶解环境下酶解样本，释放基因组DNA。
Buffer SG3：失活Foregene Protease，并提供DNA上柱环境。
Buffer SG4：补充提供DNA上柱环境。
Buffer PW：去除DNA中的蛋白质、RNA等杂质。
Buffer WB：去除DNA中的残留的盐离子。
Buffer EB：洗脱纯化柱膜上的DNA。
DNA-only Column：特异吸附裂解产物中的基因组DNA。
产品信息
型号 | 离心柱型 | 纯化组件 | Foregene离心柱、试剂 |
通量 | 1-24个样品 | 制备时间 | ~40 min (24个样品) |
离心机 | 台式离心机 | 组织酶解物分离 | 离心分离 |
离心柱液体盛装量 | 800 μL | 纯化柱DNA承载量 | 80 μg |
洗脱体积 | 50-200 μL | 水体处理量 | 10mL-30L |
操作流程
说明书
产品文献
MSDS
COA
提取过程中无法获得基因组DNA
Answer
通常有多种因素会影响基因组DNA产量，包括样本来源、样本保存条件、样本的预处理、操作等。
1. 水体样品泥沙含量较大，但微生物含量较少，导致过滤过程中滤膜过早堵塞，膜上微生物较少，无法获取基因组DNA。
建议：如果样品中含有大量泥沙，建议将样品静置一段时间后，取上层液体进行过滤。
2. 水体样品过滤体积过小或者是水体中微生物含量较少，可能导致提取不到相应的基因组DNA。
建议：对于微生物含量较少的水体样本品，应尽量增加过滤体积，如自来水应使用2L以上进行过滤，进行基因组DNA提取操作。
3. 试剂盒保存不当或存放时间太长，导致试剂盒里面某些组分失效。
建议：购置新的水体基因组DNA提取试剂盒进行相关操作。
4. Buffer WB没有添加无水乙醇。
建议：确认Buffer WB中添加正确体积的无水乙醇。
5. 洗脱液没有正确滴加到硅胶膜上。
建议：将65℃预热的洗脱液滴加到硅胶膜的正中间，并在室温放置5分钟增加洗脱效率。
提取获得低产量基因组DNA
Answer
1. 水体样品泥沙含量较大，但微生物含量较少，导致过滤过程中滤膜过早堵塞，膜上微生物较少，无法获取基因组DNA。
建议：如果样品中含有大量泥沙，建议将样品静置一段时间后，取上层液体进行过滤。
2. 水体样品过滤体积过小或者是水体中微生物含量较少，可能导致提取不到相应的基因组DNA。
建议：对于微生物含量较少的水体样本品，应尽量增加过滤体积，如自来水应使用2L以上进行过滤，进行基因组DNA提取操作。
3. 洗脱液问题。
建议：请使用Buffer EB进行洗脱；如果使用ddH2O或其他洗脱液，确认洗脱液的pH值在7-8.5之间。
4. 洗脱液没有正确滴加。
建议：请将洗脱液滴加到硅胶膜的正中间，并在室温放置5分钟增加洗脱效率。
5. 洗脱液体积太少。
建议：请按说明书上要求使用洗脱液进行基因组DNA洗脱，最少不要低于50μL。
提取获得基因组DNA纯度低
Answer
基因组DNA纯度低会导致下游实验的失败或效果不理想，如：酶切不开，PCR得不到目的基因片段等。
1. 滤膜没有剪碎，造成裂解不完全。
建议：在裂解之前，应严格按照说明书，将滤膜尽量剪碎。一般情况下，建议只剪取1/2滤膜进行基因组DNA提取，在微生物含量非常少的情况下可使用整张滤膜进行基因组DNA提取。
2. 杂蛋白污染、RNA污染。
分析：没有使用Buffer PW洗涤纯化柱；Buffer PW洗涤纯化柱没有使用正确的离心转速。
建议：在上清液过柱时尽量保证上清液中无沉淀；务必按说明书进行Buffer PW洗涤纯化柱，并且此步骤不能省略。
3. 杂质离子污染。
分析：省略了Buffer WB洗涤纯化柱或者只洗涤了一次，导致残留的离子污染。
建议：务必按说明书使用Buffer WB洗涤2次，以尽量去除残留的离子。
4. RNA酶污染。
分析：Buffer中添加了外源的RNA酶；Buffer PW洗涤操作不正确，导致RNA酶残留，影响下游RNA实验操作，如：体外转录等。
建议：Foregene系列核酸提取试剂盒无需额外添加RNA酶即可去除RNA，Water DNA Isolation Kit里面所有试剂均无需添加RNA酶；务必按说明书进行Buffer PW洗涤纯化柱，并且此步骤不能省略。
5. 乙醇残留。
分析：Buffer WB洗涤纯化柱后，没有进行空管离心操作。
建议：按说明书进行正确的空管离心操作。
