| 产 品 名 称 | 粪便基因组DNA提取试剂盒 Stool DNA Isolation Kit |
| 货 号 | DE-05713 |
| 规 格 | 50T |
| 价 格 | ¥762.00 |
| 描 述 | 快速从各种粪便样本中纯化获得高质量的基因组DNA。 |
产品介绍
本试剂盒提供了从各种来源的粪便样本中快速简便的提取细菌、食物残渣等基因组DNA的方法。粪便样品中存在大量的抑制因子，这些物质即使微量存在于纯化后的DNA中也会对下游反应，如对PCR、限制性酶切等产生影响。因而纯化粪便DNA的关键在于如何有效的去除粪便中的抑制因子。
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的DNA-Only Column、全新的Foregene Protease以及独特的缓冲液体系，可以有效的去除粪便中各种抑制因子，无需有机溶剂抽提或乙醇及异丙醇沉淀，在40分钟内即可完成对粪便样品中DNA的提取操作。
试剂盒应用
该试剂盒适用于纯化以下样本基因组DNA：新鲜或冻存的人、牛、鸡、小鼠等粪便样本。
纯化DNA的应用
粪便基因组DNA提取试剂盒纯化获得的基因组DNA纯度高，可用于常规分子生物学操作，如：酶切、PCR、Southern杂交、文库构建等实验。
DNA提取得率和纯度
提取获得的粪便基因组DNA量与粪便样本的来源、存放时间、水分含量等因素相关。使用Stool DNA Isolation Kit处理各种来源粪便样本，获得的基因组DNA量和纯度见下表：
粪便来源 | 样本用量(mg) | DNA产量(μg) | OD260/280 | OD260/230 |
黄牛 | 200 | 4-6 | 1.7-1.9 | 1.7-1.9 |
家猪 | 200 | 4-6 | 1.7-1.9 | 1.8-1.9 |
家禽(鸡) | 200 | 4-6 | 1.7-1.9 | 1.7-1.8 |
注意：此表数据仅作参考，实际操作中由于所用材料的存储条件、操作熟练度等因素影响，所得数据会与此表数据有些许出入。
试剂盒内容
Lysozyme：酶解阳性菌细胞壁。
Buffer TE：用于配制100mg/ml Lysozyme的溶液和提供溶菌酶酶解环境。
Buffer SL1：提供样本蛋白酶酶解环境。
Foregene Protease：在蛋白酶酶解环境下酶解样本，释放基因组DNA。
Buffer SL2：去油脂类杂质。
Buffer SL3：失活蛋白酶并提供DNA上柱环境。
Buffer PW：去除DNA中的蛋白质、RNA等杂质。
Buffer WB：去除DNA中的残留的盐离子。
Buffer EB：洗脱纯化柱膜上的DNA。
DNA-only Column：特异吸附裂解产物中的基因组DNA。
产品信息
型号 | 离心柱型 | 纯化组件 | Foregene离心柱、试剂 |
通量 | 1-24个样品 | 制备时间 | ~40 min (24个样品) |
离心机 | 台式离心机 | 组织酶解物分离 | 离心分离 |
离心柱液体盛装量 | 800 μL | 纯化柱DNA承载量 | 80 μg |
洗脱体积 | 50-200 μL | 粪便样本处理量 | 50-200 mg |
操作流程
说明书
产品文献
Polysaccharide extracted from Enteromorpha ameliorates Cisplastin-induced small intestine injury in mice
Ren Xinxiu, Liu Lei, Liu Pingkun, Gamallat Yaser, Xin Yi, Shang Dong
大连医科大学生物技术系
Journal of Functional Foods( IF 3.47 ) Pub Date : 2018-10, DOI：10.1016/j.jff.2018.08.023
文章链接：https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S175646461830447X
MSDS
COA
提取过程中无法获得基因组DNA
Answer
通常有多种因素会影响基因组DNA产量，包括样本来源、样本保存条件、样本的预处理、操作等。
1. 粪便样本保存不当或保存时间太长，导致粪便里面的菌落死亡，基因组DNA已经降解。
建议：粪便样本保存于-20℃或者-80℃，并尽量避免反复冻融；尽量采用新近采取的粪便样本进行基因组DNA的提取。
2. 粪便用量过少。如果样本用量很少，可能导致提取不到相应的基因组DNA。
建议：对于菌落含量较少的粪便样本，尽量使用200mg样本进行基因组DNA提取操作。
3. 试剂盒保存不当或存放时间太长，导致试剂盒里面某些组分失效。
建议：购置新的粪便基因组DNA提取试剂盒进行相关操作。
4. Buffer WB没有添加无水乙醇。
建议：确认Buffer WB中添加正确体积的无水乙醇。
5. 洗脱液没有正确滴加到硅胶膜上。
建议：将65℃预热的洗脱液滴加到硅胶膜的正中间，并在室温放置5分钟增加洗脱效率。
6. 没有使用专用的试剂盒进行粪便基因组DNA的提取。
建议：使用粪便专用的Stool DNA Isolation Kit进行粪便基因组DNA的提取。
提取获得低产量基因组DNA
Answer
1. 粪便样本保存不当或保存时间太长，导致粪便里面大量的菌落死亡，基因组DNA降解。
建议：粪便样本保存于-20℃或者-80℃，并避免反复冻融；尽量采用新近采取的粪便样本进行基因组DNA的提取。
2. 粪便用量过少，提取到的基因组DNA含量会较少。
建议：尽量使用50-200mg样本进行基因组DNA提取操作，如样本量确实较少，可适当的进行增菌培养后再进行提取。
3. 洗脱液问题。
建议：请使用Buffer EB进行洗脱；如果使用ddH2O或其他洗脱液，确认洗脱液的pH值在7.0-8.5之间。
4. Foregene Protease保存不当，导致其活性降低或失活。
建议：确认Foregene Protease保存条件或者更换新的Foregene Protease进行酶解反应。
5. 洗脱液没有正确滴加。
建议：将65℃预热的洗脱液滴加到硅胶膜的正中间，并在室温放置5分钟增加洗脱效率。
6. 洗脱液体积太少。
建议：请按说明书上要求使用洗脱液进行基因组DNA洗脱，最少不要低于60μL。
提取获得基因组DNA纯度低
Answer
基因组DNA纯度低会导致下游实验的失败或效果不理想，如：酶切不开，PCR得不到目的基因片段等。
1. 样品裂解不充分。
分析：加入Buffer SL1后，没有充分混匀，使得裂解液和样品不能较好的反应。
建议：务必按照说明书要求上下颠倒剧烈混匀5sec，使得裂解液可以和样品充分接触，完成裂解。
2. 杂质吸附不完全。
分析：在加入Buffer SL2前没有将Buffer SL2充分混匀后，或是在加入后没有充分混匀或加入Buffer SL2量较少，使得吸附剂不能完全吸附样品中的杂质。
建议：务必按照说明书要求在使用前Buffer SL2充分混匀，保证溶液没有分层和结块，并加入正确体积的Buffer SL2并上下颠倒充分混匀，使得吸附剂可以和样品充分接触，起到彻底吸附杂质的作用。
3. 杂蛋白污染、RNA污染。
分析：没有使用Buffer PW洗涤纯化柱；Buffer PW洗涤纯化柱没有使用正确的离心转速。
建议：在上清液过柱时尽量保证上清液中无沉淀；务必按说明书进行Buffer PW洗涤纯化柱，并且此步骤不能省略。
4. 杂质离子污染。
分析：省略了Buffer WB洗涤纯化柱或者只洗涤了一次，导致残留的离子污染。
建议：务必按说明书使用Buffer WB洗涤2次，以尽量去除残留的离子。
5. RNA酶污染。
分析：Buffer中添加了外源的RNA酶；Buffer PW洗涤操作不正确，导致RNA酶残留，影响下游RNA实验操作，如：体外转录等。
建议：Foregene系列核酸提取试剂盒无需额外添加RNA酶即可去除RNA， Soil DNA Isolation Kit里面所有试剂均无需添加RNA酶；务必按说明书进行Buffer PW洗涤纯化柱，并且此步骤不能省略。
6. 乙醇残留。
分析：Buffer WB洗涤纯化柱后，没有进行空管离心操作。
建议：按说明书进行正确的空管离心操作。
