产品名称 | 植物叶片直接PCR试剂盒 Plant Leaf Direct PCR Kit | ||
货 号 | TP-02111 | TP-02113 | |
规 格 | 200 T | 2000 T | |
价 格 | ￥970.00 | ￥5,826.00 | |
| 描 述 | 直接使用叶片或叶片裂解液作为模板进行PCR扩增，无需单独抽提DNA，快速，灵敏度高，适合快速大规模基因检测；试剂盒包含裂解液/PCR Mix | ||
产品介绍
本产品采用独特的裂解缓冲液体系，能够快速的从多糖多酚含量低植物(如：水稻、小麦、烟草、玉米、大豆、油菜等)的叶片样本中释放出基因组DNA，用于PCR反应。裂解缓冲液处理叶片时，叶片无需研磨或剪碎处理，因此特别适合大规模基因检测。
裂解缓冲液释放基因组DNA过程可以在5-10min内完成，不需要其他去蛋白、RNA或者次生代谢产物的过程，即可将释放出的微量DNA作为模板进行PCR反应。
2× Leaf PCR EasyTM Mix具有很强的PCR反应抑制物耐受性，能直接以植物材料的裂解产物为模板，进行高效特异性扩增。该试剂包含公司专门针对直接PCR反应改造的D-Taq DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂和稳定剂。与直接裂解液配合使用能够快速简便地对样品进行检测，并具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。
D-Taq DNA polymerase是为直接PCR反应专门研制出的DNA polymerase。D-Taq DNA polymerase对多种PCR反应抑制剂具有极强的的耐受性、在各种复杂反应体系中均能高效扩增痕量的DNA，扩增速度可达2Kb/min，特别适合进行直接PCR反应。
根据植物样本差异，该产品分为两个大类：植物直接PCR试剂盒(Plant Leaf Direct PCR Kit)和多糖多酚植物直接PCR试剂盒(Plant LeafDirect PCR Plus Kit)；在PCR检测阶段，可以根据实验需求，选用普通的2× Leaf PCR EasyTM Mix或是具有防PCR扩增产物污染作用的2× Leaf PCR EasyTM Mix(UNG)。
试剂盒应用
适用范围：多种植物叶片。
样本裂解释放的DNA：仅用作PCR模板。
试剂盒可用于以下用途：转基因植株鉴定、植物基因分型等。
试剂盒局限性
扩增片段≤1kb；超过1kb，扩增效率下降或者扩增失败。
PCR产物如用于测序建议先进行PCR产物纯化。
PCR产物可能会有点突变，如用于基因克隆，请知悉。
PCR产物3’末端随机加A尾。
试剂盒内容
Buffer P1：提供植物叶片裂解反应所需的环境。
Buffer P2：中和裂解产物，使其不影响后续PCR反应。
2× Leaf PCR EasyTM Mix：包含福际生物特别改造的Taq DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等。PCR反应时，只需将适当的裂解混合液、引物、ddH2O添加到2× Leaf PCR EasyTM Mix中即可用于PCR反应。
6× DNA Loading Buffer：该Loading Buffer中不含有SDS。建议在进行琼脂糖凝胶电泳时，配搭使用试剂盒附赠的6× DNA Loading Buffer，以便取得好的电泳结果。切勿使用含有SDS的Loading Buffer，否则在电泳时会在泳道中有一大团拖尾亮光，影响实验结果。
储存条件
全程低温冰盒运输，保证试剂盒Part I、Part II处于＜4℃状态。
本试剂盒Part I保存在2-8℃。
v 试剂Buffer P1、Buffer P2、6× DNA Loading Buffer在2–8℃条件下可保存24个月。
本试剂盒Part II保存在-20℃。
v 试剂2× Leaf PCR EasyTM Mix，在-20℃条件下可保存24个月；若频繁使用，也可置于4℃短期保存(限10天内用完)。
操作流程
说明书
产品文献
MSDS
COA
正对照、待测样本均无条带
Answer
在试剂盒的使用过程中往往会遇到许多问题，比如：没有PCR扩增产物、PCR特异性差等，以下就分别对使用植物叶片直接PCR系列可能会遇到的问题进行分析。建议在进行直接PCR的同时设置阳性对照或阴性对照以便后续分析实验结果。
1. PCR反应体系或反应条件不合适。
建议：使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。
2. PCR试剂保存不当失去活性。
建议：2× Leaf PCR EasyTM Mix应保存于-20℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在4℃短时间存放。
3. 引物设计问题。
建议：尝试重新设计引物进行检查。
正对照有目的条带，待测样本无条带或条带弱
Answer
1. 叶片中多糖多酚含量较高，裂解混合液呈棕黄色甚至棕红色。
建议：使用多糖多酚植物叶片直接PCR试剂盒(Plant Leaf Direct PCR Plus Kit)。
2. 裂解液、中和液加入比例不当，裂解混合液影响PCR体系的pH值。
建议：正常条件下，中和后的裂解混合液的pH应该在7-8左右(裂解产物和Buffer P2严格按照1:1的量进行中和)。
3. 样本裂解混合液保存不当或保存时间过久，DNA基因组已经降解。
建议：裂解液可在4℃保存5天，尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。
4. 裂解混合液中抑制物过多。
建议：在PCR反应体系5-20%范围内优化模板加入量。
5. PCR循环数不足。
建议：适当增加PCR的循环数，推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂，一般PCR反应要比用纯化的DNA模板多5-10个循环为佳。
非特异性扩增
Answer
1. 退火温度偏低。
建议：适当提高退火温度。
2. PCR循环数过多。
建议：适当降低循环次数，推荐在35-40循环为佳。
3. 引物浓度偏高。
建议：适量降低引物用量。通常引物终浓度为0.2μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可以在0.1-0.5μM范围内调整引物浓度。
4. 模板加入量过多。
建议：配制PCR反应体系时，适量减少模板加入量。
空白对照出现目的条带
Answer
1. 操作工具或试剂污染。
建议：实验所有试剂或器材均应高压灭菌。实验时应规范操作，避免在加样操作中溶液倒吸或飞溅。
2. 样本间交叉污染。
建议：每个取样器只对一个样本使用；或取完一个样本后，将取样器刃口或与样本直接接触的部位浸入2%的次氯酸钠溶液中，反复涮洗数次进行清洗，然后用干净的纸巾擦干残液后再进行使用。
3. PCR产物污染。
建议：如果实验室检测同类型样本多，最好使用UNG防PCR产物污染系统的试剂盒进行实验。
