中国福际,World’s Foregene

在线留言 地图导航

在线留言

01/05

鼠尾直接PCR试剂盒—防PCR产物污染体系

无需进行费时而昂贵的DNA纯化。

样品需求量小,少到5mg小鼠组织或2-5mm鼠尾即可进行实验。

无需研磨、破碎等特殊处理,操作简便。

优化的PCR体系,使PCR具有更高的特异性、更强的PCR反应抑制物耐受性。

防污染PCR体系2× M1-PCR EasyTM Mix(UNG),有效消除由PCR产物所引起的污染,保证扩增的特异性和准确性。

产 品 名 称

鼠尾直接PCR试剂盒-防PCR产物污染体系

Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG

货    号

TP-01341

TP-01343

规    格

200 T

2000 T

价    格

1,114.00

7,525.00

描    述

快速的从鼠尾、小鼠组织样本中释放出基因组DNA,用于PCR反应,适合快速大规模基因检测增加了UNG防污染体系,杜绝假阳性

试剂盒包含裂解液/PCR Mix

产品介绍

本产品采用独特的裂解缓冲液体系可以快速的从小鼠鼠尾、鼠耳、肌肉等组织样本中释放出基因组DNA,用于PCR反应,因此特别适合大规模基因检测。

裂解缓冲液释放基因组DNA过程在65条件下10-30 min内完成,不需要其他去蛋白、RNA等的过程,即可将释放出的微量DNA作为模板进行PCR反应。

2× M1-PCR EasyTM Mix具有很强的PCR反应抑制物耐受性,能以待测样本的裂解液为模板,进行高效特异性扩增。该试剂包含Foregene D-Taq DNAPolymerasedNTPsMgCl2、反应缓冲液、PCR优化剂和稳定剂。与裂解缓冲液配合使用能够快速简便地对样品进行检测,并具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。

2× M1-PCR EasyTM Mix(UNG)2× PCR EasyTM Mix的基础上用dUTP替代了dTTP,并同时加入能够降解含有dUTP模板UNG(Uracil-N-glycosylase)。在PCR反应前,利用UNG酶降解含有尿嘧啶的PCR产物,UNG酶对不含有尿嘧啶的模板不会造成任何影响,从而保证扩增的特异性和准确性,防止了大规模基因检测时可能出现的PCR产物污染问题。

D-Taq DNA polymeraseForegene为直接PCR反应专门研制出的DNA polymeraseD-Taq DNA polymerase对多种PCR反应抑制剂具有极强的的耐受性、在各种复杂反应体系中均能高效扩增痕量的DNA,扩增速度可达2Kb/min,特别适合进行直接PCR反应。


试剂盒应用

适用范围:小鼠鼠尾、鼠耳、肌肉等组织

样本裂解释放的DNA:仅用作PCR模板。

试剂盒可用于以下用途:转基因型鉴定、动物基因分型等。



试剂盒局限性

扩增片段≤1kb;超过1kb,扩增效率下降或者扩增失败。

UNGPCR产物污染体系得到的PCR产物请勿用于基因克隆或测序。

PCR产物3’末端随机加A尾。

试剂盒内容

Buffer MP提供小鼠组织裂解反应所需的环境。

Foregene Protease Plus在裂解缓冲液的环境下,裂解鼠尾或小鼠组织,释放基因组DNA

2× M1-PCR EasyTM Mix(UNG):在2× M1-PCR EasyTMMix的基础上用dUTP替代了dTTP,并同时加入能够降解含有dUTP模板的UNG酶,从而能够有效防止PCR扩增产物污染。包含福际生物特别改造的D-Taq DNA PolymeraseUDGdNTPsMgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等。PCR反应时,只需将适当的裂解混合液、引物、ddH2O添加到2× M1-PCR EasyTM Mix(UNG)中即可用于PCR反应。

6× DNA Loading BufferLoading Buffer中不含有SDS。建议在进行琼脂糖凝胶电泳时,配搭使用试剂盒附赠的6× DNA Loading Buffer,以便取得好的电泳结果。切勿使用含有SDSLoading Buffer,否则在电泳时会在泳道中有一大团拖尾亮光,影响实验结果。


储存条件

全程低温冰盒运输,保证试剂盒Part IPart II处于<4状态。

本试剂盒Part I保存在2-8

v 试剂Buffer MP,在干燥条件下,可保存12个月;如需保存更长时间可置于2–8

v  试剂Foregene Protease Plus,具有独特配方,为保证其活性和稳定性,请保存于4,保存时间为12个月。

v  试剂6× DNA Loading Buffer,可置于4-20长期保存。

本试剂盒Part II保存在-20

v  试剂2× M1-PCR EasyTM Mix(UNG),在-20条件下可保存12个月;若频繁使用,也可置于4短期保存(10天内用完)


操作流程

鼠尾直接



  • 正对照、待测样本均无条带

    Answer

    在试剂盒的使用过程中往往会遇到许多问题,比如:没有PCR扩增产物、PCR特异性差等,以下就分别对使用鼠尾直接PCR系列试剂盒可能会遇到的问题进行分析。建议在进行直接PCR的同时设置阳性对照或阴性对照以便后续分析实验结果。

    1.    PCR反应体系或反应条件不合适。

    建议:使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。

    2.   PCR试剂保存不当失去活性。

    建议:2× PCR Mix应保存于-20,使用时避免反复冻融。若使用频繁,可在4短时间存放。

    3.    引物设计问题。

    建议:尝试重新设计引物进行检查。


  • 正对照有目的条带,待测样本无条带或条带弱

    Answer

    1.    PCR条件没有使用正确。

    建议:请仔细确认2× PCR Mix的类型,对应相应的PCR条件进行PCR扩增。

    2.    加入组织裂解液过量。

    建议:增大反应体系,或减少裂解液的用量。

    3.    样本裂解混合液保存不当或保存时间过久,DNA基因组已经降解。

    建议:裂解混合液液可在4保存2-3天,尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR

    4.    模板加入量不适合。

    建议:在反应体系10-20%范围内优化模板加入量。反应效性能较差时,可以降模板浓度调节到低于10%的范围。

    5.    PCR循环数不足。

    建议:适当增加PCR的循环数,推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂,一般PCR反应要比用纯化的DNA模板多5-10个循环为佳。


  • 非特异性扩增

    Answer

    1.    退火温度偏低

    建议:适当提高退火温度。或对退火温度做一个梯度摸索。

    2.    PCR循环数过多。

    建议:适当降低循环次数,推荐在35-40循环为佳。

    3.    引物浓度偏高。

    建议:适量降低引物用量。通常引物终浓度为0.2μM可以得到较好结果。反应性能较差时,可以在0.1-0.5μM范围内调整引物浓度。

    4.    模板加入量过多。

    建议:将模板加入量控制在10-20%。反应效性能较差时,可以降模板浓度调节到低于10%的范围。


  • 空白对照出现目的条带

    Answer

    1.    操作工具或试剂污染。

    建议:实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。

    2.    样本间交叉污染。

    建议:每个取样器只对一个样本使用;或取完一个样本后,将取样器刃口浸入2%的次氯酸钠溶液中,反复涮洗,然后用干净的纸巾擦干残液。

    3.    PCR产物污染。

    建议:如果实验室检测同类型样本多,最好使用UNGPCR产物污染系统的试剂盒进行实验。


相关产品

COA