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细胞直接RT-qPCR试剂盒-SYBR Green I

简单、有效的Cell Direct RT技术,只需7min即可得到RNA样本。

样品需求量小,最少10个培养细胞即可进行实验。

高通量,可以快速对384、96、24、12、6 孔板等培养细胞进行RNA检测。

DNA Eraser能够快速去除释放的基因组,大大降低对后续实验结果的影响。

优化的RT及qPCR体系,使两步法RT-PCR具有更高效的逆转录和PCR特异性、更强的RT-qPCR反应抑制物耐受性。

产品名称

细胞直接RT-qPCR试剂盒-SYBR Green I

QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit–SYBR Green I

货  号DRT-01011DRT-01012
规  格200 T1000 T
价  格询价询价
描  述

直接裂解细胞释放RNA,进行RT-qPCR;高耐受性体系,使得无需纯化RNA,直接使用细胞裂解产物即可作为RNA模板进行RT反应


产品名称

细胞直接RT-qPCR试剂盒-SYBR Green I组分补充包-1

Cell Lysis Solution / 细胞裂解液(24-well lysis system / well)

货  号 DRT-01011-A1DRT-01011-A2
规  格100 T500 T
价  格询价询价
描  述快速裂解细胞,释放核酸;试剂盒补充组分,可单购买。


产品名称

细胞直接RT-qPCR试剂盒-SYBR Green I组分补充包-2

5× Direct RT Mix / RT反应液(20 μL reaction system)

货  号 DRT-01011-B1
规  格200 T
价  格询价
描  述直接RT反应体系;试剂盒补充组分,可单购买。



产品名称

细胞直接RT-qPCR试剂盒-SYBR Green I组分补充包-3

2× qPCR Mix / qPCR反应液(20 μL reaction system)

货  号 DRT-01011-C1DRT-01011-C2
规  格200 T1000 T
价  格询价询价
描  述直接RTqPCR反应体系;试剂盒补充组分,可单购买。



产品介绍

本产品采用独特的裂解缓冲体系可以快速的从培养细胞样本中释放出RNA,用于RT-qPCR反应,消除了费时费力的RNA纯化过程,只需7min即可得到所需要的RNA模板,配合试剂盒提供的5× Direct RT Mix 2× Direct qPCR Mix-SYBR能够快速有效的得到实时定量PCR结果。

5× Direct RT Mix 2× Direct qPCR Mix-SYBR 具有很强的抑制物耐受性,能以待测样本的裂解液为模板,进行高效逆转和特异性扩增。该试剂包含福际独有的RNA高亲和性Foregene Reverse Transcriptase,以及Hot D-Taq DNA PolymerasedNTPsMgCl2、反应缓冲液、PCR优化剂和稳定剂,与裂解缓冲液配合使用能够快速简便地对样品进行检测,并具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。


试剂盒应用

适用范围:培养细胞。

样本裂解释放的RNA:仅适用于本试剂盒的RT-qPCR模板。

试剂盒可用于以下用途:基因调控表达分析、验证siRNA介导的基因沉默效果、药物筛查等。


试剂盒局限性

扩增片段≤300bp

试剂盒用于新鲜培养细胞

适用于高通量细胞基因表达筛选,切勿用于引物探针验证。




试剂盒内容

Part I

Buffer CL:提供细胞裂解反应所需环境。

Buffer ST:终止裂解液中的活性物质,避免对后续RT造成影响。

Foregene Protease Plus II:在裂解缓冲液的环境下,裂解细胞,释放核酸。

Part II

DNA EraserDNA 去除剂,去除基因组对后续实验的影响。

5× Direct RT Mix:包含福际生物专门研制的RNA亲和性Foregene Reverse Transcriptase,以及RNase InhibitordNTPs、稳定剂、增强剂、优化剂及优化配比的逆转录引物(Random PrimerOligo(dT)18 Primer)

2× Direct qPCR Mix-SYBR:该试剂包含福际生物Hot D-Taq DNA PolymerasedNTPsMgCl2、反应缓冲液、SYBR Green IPCR优化剂和稳定剂。

ROX Reference Dye:一般用于ABIStratagene等公司的Real Time PCR扩增仪上,用于调整PCR加样误差所引起的 PCR管与管之间的差异。不同仪器所需ROX Reference Dye浓度不同,用户可以根据仪器的推荐浓度添加。

RNase-Free ddH2O:无RNase灭菌超纯水,用于两步法RT-qPCR反应。


储存条件

全程低温冰盒运输,保证试剂盒Part IPart II处于<4状态。

本试剂盒Part I保存在2-8℃;Part II保存在-20

v  Foregene Protease Plus II应置于4保存,切勿冻存于-20

v  试剂2× Direct qPCR Mix-SYBR避光保存于-20°C;若频繁使用,也可置于 4°C短期保存( 10 天内用完)

  • Real Time PCR引物设计原则

    Answer

    Forward PrimerReverse Primer

    进行Real Time PCR,引物设计非常重要。引物关系到PCR扩增的特异性、高效性等,可以参照以下原则进行引物设计:

    u  引物长度:18-30bp

    u  GC含量:40-60%

    u  Tm值:引物设计软件,如Primer 5,可以给出引物的Tm值。上下游引物的Tm值应    尽量接近。也可以使用Tm计算公式:Tm=4(G+C)+2(A+T)。进行PCR时,一般选择低于引物Tm5的温度作为退火温度(相应的提高退火温度可以增加PCR反应的特异性)

    u  引物及PCR产物:

    v  设计引物PCR扩增产物长度最好在100-150bp

    v  应尽量避开在模板的二级结构区域设计引物。

    v  避免上下游引物3’端之间形成2个或2个以上的互补碱基。

    v  引物3’端碱基不能存在多余3个连续的GC

    v  引物自身不能存在互补结构,否则会形成发夹结构,影响PCR扩增。

    v  引物序列中ATCG应尽量分布均匀,3’端碱基避免为T


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