师兄师兄，反转录完成了，终于到最后一步——荧光定量PCR！欸，师兄，话说荧光定量PCR是什么啊？

PCR你总知道吧？

  知道啊，PCR就是聚合酶链式反应，是把DNA变多的技术！

差不多吧……是通过特定引物，将目的序列扩增到百万倍以上的技术方法，但这只是表明目的序列的有无，并不能确定初始模板量的多少。

荧光定量PCR就是为了解决这个问题而研究出的技术方法，real time PCR、quantity PCR（qPCR）一般都是指的它。

  那与普通PCR的区别就在于荧光定量了么？

对，就是在每一次PCR循环的延伸阶段，检测荧光信号强度，根据信号强度变化就可以推算出初始模板量了。

  感觉好复杂！这些都要我自己计算么？

这个要你慢慢学习，最好是能够明白其中原理。现在可以先关注CT值，这个是比较直观的实验数据，它的大小对应初始模板量的大小。

还有就是扩增曲线、熔解曲线等图表，你的实验是否成功它们说了算。

  哦，好的师兄。那我去做qPCR实验了！

等等！要记得加样顺序：按除模板外体系中各组分体积占比从大到小的顺序添加，最后添加模板！这样可以最大程度避免加样误差以及

实验过程中可能的交叉污染。

特别注意不要在试剂区加模板，不然你未使用的mix非常容易被污染！

  知道啦，师兄！